Suositut Night At The Museum -elokuvat saavat jatkoa helmikuussa, kun museon vartija Larry (Ben Stiller) palaa taas valkokankaille.
Tarina alkaa tällä kertaa 1930-luvun Egyptistä, missä maaginen laatta saa ensimmäisen kerran muinaiset historianhenkilöt heräämään eloon. Siirrymme takaisin tämän päivän New Yorkiin ja tapaamme museon sympaattisen vartijaystävämme Larryn, jonka elämä ja työ museossa on muuttunut aikalailla. Myös edellisistä elokuvista tutut hauskat hahmot kuten Octavius (Steve Coogan), Jedidiah (Owen Wilson), Teddy Roosevelt (Robin Williams) ja Dexter-apina ovat jälleen mukana menossa.
Seikkailu alkaa, kun kesken gaalaillallisen Larry huomaa maagisen laatan voimien hupenevan, ja taian katoavan. Larryn ja hänen joukkojensa on pikaisesti lennettävä Lontooseen tapaamaan laatan alkuperäisiä omistajia – Akmenrahin vanhempia – yhdistääkseen voimansa heidän kanssaan, ja näin pitämään muinaisen laatan taikuus voimissaan. Aikaa ei ole hukattavana, ja Larry on ainoa, joka voi ratkaista tehtävän. Koska päänäyttämönä on British Museum, luvassa on yllätyksiä ja täysin uusia tuttavuuksia, jotka heräävät seikkailuun ensimmäistä kertaa.